酶抑制法检测蔬菜农药残留实验技术

来自 实验室仪器网

目前，应用于果蔬农药残留检测方面的技术有很多，比如说仪器分析法、生物活体分析法以及酶抑制法等，相比之下，仪器分析法不仅检测成本较高，而且技术难度较大，无法在短时间内掌握果蔬的质量安全，生物活体分析法准确性低，检测结果不具备参考价值。而酶抑制法不仅简便、灵敏，而且检测快速，可以在最短的时间内对果蔬的质量安全情况进行了解。由此可见，在未来的时间里，酶抑制法在果蔬农药残留检测方法必然会得到越来越广泛的应用。现通过选取NC-800农药残毒快速测定仪做例检测技术的简要介绍，来为日后蔬菜农药残留检测工作的开展提供的参考。

酶抑制法概述

• 工作原理

酶抑制检测法主要对较有高、毒的机磷和氨基甲酸类农药进行检测的方法。上述的两种类型的农药是乙酰胆碱酯酶的底物，（改为：酶抑制法主要针对具有高、毒特性的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测。上述两种类型的农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性。）所以，在对其进行检测的时候，可以采用乙酰胆碱酯酶的活性来检测样品中是否含有以上两类农药，在酶反应试验中加入显色剂和底物观察颜色的变化，能够判断出果蔬中是否含有有机磷和氨基甲酸类农药残留。对其两种农药的残留情况进数据分析，给判断结果提供科学的依据。

• 技术优势

就目前酶抑制法在果蔬农药残留检测方面的应用优势来看（1）独创打印机内置式防尘设计；（2）六通道测试技术，一次测量6个样品，同时显示测量结果；（3）适用于移动实验室；（4）最多存储5000条样品数据；（5）人性化计算机操作程序，具备查询统计功能；（6）具备独创直联式网络联接功能；（7）具备分布式农残监测信息网络方案，可由电脑生成检测报告，并即时启动网络传输，并反应至安全监测信息网络。

检测方法

采用酶抑制法开展果蔬农药残留检测工作。

（1）对照测试。根据检测样品不同，对照测试的具体开展细节也存在一定程度的细微差别，但大多采用的是以下测试方法：取酶100μL，然后加入1cm比色皿中，加缓冲液2.5mL，混匀静置抑制10分钟后，并在此基础上加入显色剂100μL，加入底物100μL，混匀后第一时间将其放入仪器内的样品池进行对照测试；按“对照测量”待到设定的测量时间后可得数据ΔAo值。

（2）样品测试。无论是水果样品还是蔬菜的检测样品，在测试的时候，都需要将其切成1cm见方的小块，瓜果类削皮，叶菜类剪叶然后取出2g放到三角烧瓶中，（改为：在测试的时候，瓜果类削皮，叶菜类剪叶，切成约1cm见方的小块，然后取出2g放到三角烧瓶中，）然后在瓶中加入10mL缓冲液，振荡1分钟左右，用滤纸将混合液中的固体物滤除，所得到的清液便可以作为待测样品液。待测样品取得之后，接下来的任务就是测试，首先要取酶100μL，加入1cm比色皿中，加入待测试液2.5mL，混匀静置抑制10分钟后，再加入显色剂100μL，加入底物20μL；混匀后第一时间将其放入仪器内进行样品测试。待到设定的测量时间后可得数据ΔAt值。

（3）结果计算。测试完成之后便可进行结果计算，酶抑制法对果蔬农药残留检测的计算公式为：抑制率（%）=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%。其中，ΔA0、ΔAt分别表示的是对照测试的吸光度变化值和样品测试的吸光度变化值。

（4）结果判断。结果计算出中所得到了抑制率所表示的就是酶被抑制的程度，（改为：计算结果中所得到的抑制率表示的是酶被抑制的程度，）不用数字的抑制率表示果蔬样品中农药残留的程度也不相同，40%以下为合格样品，40%-50%之间为可疑农药残留超标样品，而50%以上的则是农药残留超标样品。一般来说，对于40%以上的样品，应该进行必要的2次以上测量，如果条件允许，还可以用气相色谱仪等方法对检测结果作进一步确认。

注意事项

在利用酶抑制法开展果蔬农药残留检测工作的时候，为了确保检测结果的准确性和及时性，在开展工作的时候，检测人员需要注意以下事项：

1、注重酶的重要性。应用酶抑制法进行果蔬检测的时候，检测工作的灵敏度和结果的可靠性与酶的种类有直接的关系，乙酰胆酯酶是有机磷和氨基甲酸酯类药剂的最适反应底物，其活性能够专一性的被上述两类农药所抑制，所以，采取酶来对这两类农药进行检测，其效果更具可靠性。

2、静置时间。静置时间的控制对检测结果也会造成直接的影响，无论是时间过长或过短，都会导致检测结果的准确性受到影响。所以，在检测工作中，检测人员必须要将静置时间严格控制在10分钟，避免由于时间误差而给检测结果造成的影响。

3、反应温度。通常情况下，酶显色反应的温度应该在37-38℃之间，一旦温度低于37℃，那么酶反应的速度就会变慢，延长检测的时间，所以检测前要开机预热。（备注：此处表述有不妥，开机预热是为了让仪器达到稳定状态的。仪器的“对照测试”已经克服了温度带来的影响。）

4、保存环境。样品提取液的pH对乙酰胆碱酯酶的活动有影响，最佳测试pH为7.5-8.0，既适合于酶的反应，适合于蔬菜中农药的提取。

5、样品提取条件。酶试剂、显色剂以及底物的保存在0-5℃环境，但切忽结冰，在使用的时候则应该等到其恢复到室内温度时才能够使用。

6、试剂配制。配缓冲液及底物试剂时只能用的可以是蒸馏水或纯净水，不能用矿泉水、自来水。

7、防止试剂污染。器具专用所有用于转移试剂样品的器具都要专用并贴上标志，以混用而造成交叉污染。用可调移液器吸取不同试剂或样品液时，必须更换不同的塑料吸嘴。每种试剂“只出不进”

8、用移液器吸时，应先将按手按至第一档（即按下去有一阻力点的位置，不能将按手按到底）再将吸嘴伸进溶液中，缓缓放手将溶液吸上，要将吸进的溶液放出来，就需要将手按到底。（备注：加“按”字显通顺点）

9、检测后用具清洁。所使用过的用具或工具如比色皿、移液器、塑料吸嘴、三角瓶、漏斗、烧杯等首先用自来水冲洗干净，再用纯净水或蒸馏水冲洗，凉干。小塑料吸嘴、比色皿需用纯净水或蒸馏水浸泡30分钟后捞上来再凉干，重复使用。

综上所述，随着社会各界对农作物产品质量安全重视程度的不断提高，对蔬菜农药残留检测技术也进行不断优化与完善也是非常重要的。从本文的介绍我们能够看出，酶抑制法在果蔬农药残留检测方便、灵敏、快速、经济，能够在最短的时间内了解蔬菜农药残留情况。为人们能够吃上安全的蔬菜和水果提供充足的保障。

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