牛乳中农残留有哪些检测方法？

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牛乳中的农yao残留测定常用的检测方法可分为化学检测、生化检测和生物检测三大类，目前这三大类中研究较多的有仪器分析法、酶抑制法、生物传感器法、免疫分析法、活体检测法等，本文将进行详细阐述。

仪器分析法

仪器分析法是农yao残留检测中最经典、最常用的技术。由于农yao的活性成分大多是小分子有机化合物，故多使用气相色谱(Gc)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱一质谱联用(GC—MS)和高效液相色谱一质谱联用(肿LC—MS)等技术。其中研究最多的是色质联用技术，因为色质联用特别适合于多残留分析。

仪器分析法具有灵敏度高、准确度好等优点，但其需要昂贵的仪器、专业的分析人员，且样本预处理较繁琐。近年来，固相萃取(sPE)、固相微萃取(SPME)、超临界流体萃取(SFE)、微波萃取(MAE)、快速溶剂萃取(ASE)、凝胶渗透色谱(GPC)等前处理技术不同程度地出现了自动化仪器装置，都试图朝着快速的方向发展。在残留分析技术中仪器分析方法的地位仍是不可取代的。

酶抑制法

目前，在农yao残留快速检测方法的开发中酶抑制法是研究最多且相对成熟的一种。由于有机磷与氨基甲酸酯化合物为神经系统乙酰胆碱酯酶的不可逆抑制剂，因此酶抑制法是对部分农yao进行残留快速检测的技术。依据酶抑制设计的农yao残留检测方法主要有试纸法、比色法。

• 试纸法

将敏感生物(jc口牛血清)的胆碱酯酶和乙酰胆碱类似物2，6一二氯靛酚乙酸酯分别经固定化处理后加载到滤纸片上。靛酚乙酸酯在胆碱酯酶的催化下迅速发生水解反应，生成蓝色的靛酚和乙酸。如果胆碱酯酶与有机磷或是氨基甲酸酯类农yao结合，便失去催化靛酚乙酸酯水解的能力。因此，依据是否抑制蓝色产物的生成，以及目测产生蓝色的程度来判断农yao残留的情况。该方法具有不需仪器设备，操作方便、快速，测试成本低等优点。

• 比色法

比色法是将样品残留的提取液与胆碱酯酶作用，以碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)等为底物，二硫代一二硝基苯甲酸(D’rNB)等为显色剂，经一定时间反应后，根据产生黄色物质的程度，利用农yao残留速测仪在410nm波长下比色。由吸光值的变化计算胆碱酯酶的抑制率，从而判断有机磷和氨基甲酸酯类农yao残留情况。

比色法具有可靠性和灵敏性高及成本低等明显优势。是目前快速检测使用的主要方法。此法所用仪器是分光光度计改装成的适合比色法检测要求的农yao残留速测仪，其具有操作简单、快速、自动化程度高、灵敏度合适、成本低等优点。农业部农yao检定所等单位开发研制了应用丁酰胆碱酯酶检测农yao残留。

酶抑制法操作简单、速度快、无需仪器或仪器相对简单、测试成本低廉，他适用于现场的定性和半定量测定，对实现现场检测农yao残留和大批量样品的筛选具有一定的指导和实践意义。经酶法检测出阳性后，可以通过标准仪器检验方法进一步检测，来鉴定残留农yao品种及准确残留量。

生物传感器法

生物传感器是由一种生物敏感部件(如胆碱酯酶)与转换器紧密配合，对特定种类化学物质具有选择性和可逆响应的分析装置。用于农yao残留速测的生物传感器技术，是建立在普通生物传感器技术与农yao学相结合基础上的，包括酶传感器、组织传感器等多种类型。

生物传感器是目前农yao残留速测技术中的研究热点，在测定方法多样化、缩短响应时间、提高测量灵敏度和自动化程度以及适应现场检测能力等方面已取得了长足进步。近年来我国利用农yao对标靶酶活性的抑制作用研制出了酶传感器，此法的检测灵敏度和准确性都有了很大提高。但由于现阶段胆碱酯酶等生物材料在固定化过程中容易失活的问题还没有很好解决，影响了这一技术的推广应用。

酶联免疫分析法

近年来，免疫分析法十分活跃的用于农yao残留快速检测的研究中。免疫分析法有放射性免疫分析、酶免疫分析、多组分分析物免疫分析、免疫传感器分析等方法。其中最为常用的方法是酶联免疫法(EuSA法)，他主要是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础，依靠比色来确定农yao残留情况的检测方法。酶联免疫测定技术是生物酶技术、免疫分析技术相结合应用于农yao残留分析领域的一门新技术，目前已有部分特异性的酶联免疫试剂盒在使用。

免疫分析法具有专一性强、灵敏度高、快速、操作简单等优点。免疫试剂盒可广泛用于现场样品和大量样品的快速检测，可准确定性、定量。但是由于农yao的种类多、抗体制备的难度大，并且在不能肯定样本中的农yao残留种类时，免疫分析检测具有一定的盲目性，而且抗体依赖于国外进口，因此酶联免疫法的应用范围受到较大的限制。

活体生物测定法

活体生物测定法使用发光细菌或敏感性家蝇作为测定材料。

• 农yao残留的发光菌快速检测

发光细菌在正常生活状态下，体内的荧光素在有氧参与时，经荧光酶的作用会产生荧光。当发光菌受到有机磷农yao等化合物的毒性作用时，发光减弱，其减弱程度与毒物的浓度呈线性相关。此项技术适用于有机磷农yao残留的检测，但是发光菌被激活以后，他的发光强度会随时间的变化而改变，实际分析时间的掌握有一定的难度。

• 敏感家蝇检测农yao残毒

敏感性家蝇对几大类杀虫剂都具有敏感性。用含有杀虫剂的样品喂食家蝇，记录家蝇存活情况，由此可以对样品的农yao残留进行质量控制。此项技术可以指导制定生产中农yao的使用剂量并可进行样品自检。其局限性为需要繁殖饲养大量的敏感性家蝇，前期准备工作比较复杂。

结束语

农yao残留分析是一门综合性很高、涉及面很广的分析科学。随着科学技术的不断发展，残留分析技术也在不断地更新、完善和迅速发展，尤其是更能适应现代高效、快节奏社会要求的速测技术。开发农yao残留的快速检测技术是为满足目前食品、环境等领域的监测需要，但在实际应用中，应根据检测目的和要求、测试环境以及待测农yao性质和样本的种类等选择合适的检测方法。

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